Центрифугирование в иммуноанализе

С помощью центрифугирования фракционируется цельная кровь с получением плазмы и форменных элементов, выделяются антигены, гормоны и другие аналиты из тканевой жидкости, цитопалзмы, клеточных ядер и т.д.

Для решения этих и иных задач необходима лабораторная центрифуга исследовательского уровня, позволяющая гибко регулировать режимы обработки биосубстанций.

Ниже приведены примеры использования центрифуг при решении конкретных задач.

Процедуру повторяют 2-3 раза. Очищенные клетки подвергают лизису с последующей ресуспензией в буферной среде того или иного состава при щадящем перемешивании в течении 15 минут.

Полученный лизат вновь центрифугируют в течение 10 мин на скорости14000 об/мин. После этого в разлитых по аликвотам образцах анализируется концентрация выделенных из цитоплазмы белков.

Для дальнейшего исследования выбираются образцы с оптимальной концентрацией – 200-400 мкг/мл.

Биосубстрат отмывают, центрифугируя в конической пробирке стандартного объема (15 мл) в течение 5-6 минут при ускорении 800 g. Выпавшие в осадок клетки лизируются в гипотоническом буферном растворе с добавлением требуемых ингибиторов и переносятся в микро-пробирки для дальнейшей обработки.

После этого материал в течение 10 минут подвергают действию низких температур (пробирки помещают на лед). К охлажденным образцам добавляют детергент и центрифугируют в течение 5-6 минут в рефрижераторной центрифуге при ускорении 800 g и температуре 4°C.

К их общим преимуществам при обработке биоматериала для выделения антител, онкомаркеров, гормонов, ревматоидных факторов и иных компонентов из клеток и тканевой жидкости относятся следующие объективные моменты:

• стопроцентное соответствие режима центрифугирования методическим требованиям за счет двойного контроля баланса и автоматической коррекции скоростных параметров;

Кроме того, того полифункциональные приборы поддерживают режимы быстрого и медленного вращения, а также снабжаются предустановленными программами для решения специфических задач, таких как определение гематокритного числа, подготовка цитологических препаратов и др.

Среди таких устройств – высокоскоростная центрифуга K242, способная при необходимости работать на низких скоростях, в том числе – с качающимися роторами, комплектуемыми бакетами общим объемом до 2 литров или микропланшетами. Для центрифугирования клеточных ядер или иного биоматериала в условиях пониженных температур разработан аналог этой модели с системой принудительного охлаждения – K242R.

В линейку центрифуг исследовательского класса также входят приборы, рассчитанные на решение узкого круга задач. В некоторых случаях более рациональным выглядит комплектация лаборатории узскоспециализированным аппаратом, таким как микроцентрифуга К1015.

Модель поддерживает работу со всеми модификациями высокоскоростных микророторов, а также с угловым ротором BRK5408 на 8 пробирок объемом по 15 мл (максимальное ускорение – 3500 g) и работающим в аналогичном скоростном режиме ротором BRK5407 на 4 пробирки по 15 мл или 4 пробирки по 10 мл (при комплектации соответствующими адаптерами).

Данный аппарат позволяет фракционировать живые клетки в щадящем скоростном режиме, а также получать компоненты цитоплазмы и межклеточной жидкости при комнатной температуре.