Электронная почта: info@analytexpert.ru
Телефон/факс:
+7 (495) 981-66-86 многоканальный
Для регионов:
8 800 333-78-66 бесплатный звонок
АналитЭксперт

Центрифугирование биоматериала для ПЦР-диагностики возбудителей инфекции

Полимеразная цепная реакция – быстрый, чувствительный и точный метод анализа, позволяющий обнаружить не только единичные бактерии или вирусы, но и их фрагменты. Благодаря этому, с помощью ПЦР-диагностики можно определить наличие инфекции и дифференцировать возбудителя в тех случаях, когда исследование мазков под микроскопом, иммунологический анализ либо бактериологические методы не выявили источник проблемы.


ПЦР-диагностика – эффективный метод выявления патогенной микрофлоры

ПЦР-диагностика – эффективный метод выявления патогенной микрофлоры

В процессе предварительной обработки биоматериала при подготовке образцов для проведения полимеразной цепной реакции в ряде случаев используется центрифугирование.

Центрифугирование мокроты при подготовке проб для выделения ДНК (РНК)

Предварительно необходимо выполнить разжижение мокроты. С этой целью готовят различные щелочные растворы или пользуются специальным реагентом – Муколизином. Для качественного и полного разжижения емкость периодически встряхивают – вручную или с помощью шейкера. Через 20-30 минут материал готов для дальнейшей обработки.

Для этого в центрифужную пробирку емкостью 1,5-2 мл отбирают 1 мл мокроты и центрифугируют образцы в течении 10 минут при скорости 10000 об/мин.

Дальнейшая предварительная обработка определяется направлением исследования:

  • При поиске фрагментов бактериальной флоры полностью удаляют супернатант, используя специальный вакуумный прибор с колбой-ловушкой. К осадку добавляют фосфатный буфер, доводя общий объем
    пробы до 0,1 мл.
  • При поиске фрагментов вирусной РНК из супернатанта с помощью специального наконечника с аэрозольным барьером отбирается 0,2 мл надосадочной жидкости в отдельную пробирку емкостью 1,5 мл.

Центрифугирование мочи при подготовке проб для выделения ДНК (РНК)

В качестве материала для микробиологического анализа используется первая утренняя порция мочи, количество которой не должно быть менее 20 мл. 10 мл мочи помешается в стерильную пробирку емкостью 20 мл, закрывающуюся герметично завинчивающейся крышкой.


Стерильные одноразовые пробирки для мочи в индивидуальной упаковке с цветовой маркировкой

Стерильные одноразовые пробирки для мочи в индивидуальной упаковке с цветовой маркировкой

После встряхивания образцы центрифугируют при ускорении
10000 G в течение 10 минут. После этого с помощью вакуумного отсасывателя, оснащенного колбой-ловушкой, аккуратно удаляют надосадочную жидкость. Осадок смешивают с 0,5 мл физраствора, тщательно перемешивают и вновь центрифугируют в течение
10 минут при скорости 12 000 об/мин. После повторного центрифугирования надосадочную жидкость вновь полностью удаляют. Оставшийся осадок ресуспендируют в физрастворе при тщательном перемешивании, доводя объем пробы для 0,1 мл.

Центрифугирование плазмы при подготовке проб для выделения ДНК (РНК)


Центрифужные пробирки с пробкой-колпачком емкостью 1,5 мл

Центрифужные пробирки с пробкой-колпачком емкостью 1,5 мл

Плазму выделяют из цельной крови, забранной из вены натощак, не позднее чем через 6 часов (хранение при комнатной температуре) или 24 часа (хранение в холодильнике при температуре от 2°C до 8°C) после манипуляции. При необходимости транспортировки биоматериала в лабораторию используют термосы или охлаждающие контейнеры.

Центрифугирование производится на скорости 3000 об/мин, время обработки образца – 10 минут. Для отбора полученной плазмы в пробирки Эппендорфа емкостью 1,5 мл пользуются специальными наконечниками с аэрозольными барьерами.

Если цель анализа – обнаружение в плазме фрагментов генетического материала бледной трепонемы (возбудитель сифилиса), осуществляется дополнительная концентрация посредством центрифугирования в течение 10 минут при ускорении 13 000 G. Вслед за этим супернатант полностью удаляется, 1 мл оставшегося осадка используют для последующего выделения дезоксирибонуклеиновой кислоты.

Приготовленный таким способом образец можно хранить:


Диапазон температур в морозильнике для плазмы крови FROSTER-BL-178

Диапазон температур в морозильнике для плазмы крови FROSTER-BL-178 производства немецкой компании Philipp Kirsch обеспечивает возможность хранения пробирок с плазмой крови в течение месяца

  • в течение суток – в холодильнике при температуре от 2°C до 8°C;
  • в течение месяца – в морозильнике при температуре -20°C;
  • в течение продолжительного периода времени – при замораживании до -70°C.

Повторное замораживание плазмы не допускается, поэтому образцы для длительного хранения предварительно разливают в стерильные пробирки, способные выдержать глубокое замораживание.

После предварительной обработки биоматериал подвергают многократному повторному центрифугированию, в процессе которого происходит выделение РНК либо ДНК и их очистка.

Преимущества центрифуг Centurion Scientific при подготовке проб для ПЦР

Конструкторы британской компании Centurion Scientific разрабатывают лабораторные центрифуги со сменными роторами, рассчитанными на центрифугирование пробирок различного объема в широком диапазоне скоростей.


Центрифуга Centurion Scientific К1015

Центрифуга Centurion Scientific К1015

Идеальным решением для оснащения лаборатории, внедряющей метод ПЦР-диагностики, станет микроцентрифуга с шестью угловыми роторами модели К1015 серии Pro-Research. С помощью данного прибора можно провести поэтапную подготовку для анализа мочи, плазмы и мокроты, выбрав подходящий ротор и скоростной режим.

К общим достоинствам центрифуг этой линейки также следует отнести:

  • поддержку технологии автоматического определения модели ротора, что полностью исключает возможность превышения допустимых нагрузок;
  • использование оригинальных конструктивных решений, позволяющих обеспечить максимальную однородность температуры по всему объему центрифужной камеры;
  • комплектацию тахометром-балансировщиком последнего поколения, автоматически корректирующим положение ротора по трем осям в режиме реального времени;
  • оснащение газлифтами с мягким ходом и надежной фиксацией открытой крышки в заданном положении для повышения удобства работы и во избежание риска травмирования рук оператора
  • идеальную отбалансированность роторов;
  • возможность гибкой установки скоростных параметров с шагом 1 об/мин и последующим сохранением режима центрифугирования в одной из 108 ячеек встроенной памяти;
  • наличие 10-ти режимов разгона и торможения;
  • оснащение панелью управления с большим и ярким сенсорным ЖК-дисплеем, на который выводятся параметры центрифугирования в режиме реального времени, сообщения об ошибках, информация о модели ротора;
  • наличие электронного замка, предупреждающего запуск прибора при неплотно либо неправильно закрытой крышке и поддерживающего возможность ее механического открытия при аварийном отключении электроэнергии.

Вернуться к списку

«АГ Аналитэксперт» представляет современные настольные центрифуги производства компании «Centurion Scientific» специального и общелабораторного назначения. Широкий модельный ряд включает как специализированные устройства, так и универсальные лабораторные центрифуги, совместимые с большим количеством сменных роторов различного объема. Если у Вас возникла потребность купить надежную центрифугу европейского качества, свяжитесь с нами, мы будем рады Вам помочь!