Центрифугирование биоматериала для ПЦР-диагностики возбудителей инфекции

В процессе предварительной обработки биоматериала при подготовке образцов для проведения полимеразной цепной реакции в ряде случаев используется центрифугирование.

Центрифугирование мокроты при подготовке проб для выделения ДНК (РНК)

Предварительно необходимо выполнить разжижение мокроты. С этой целью готовят различные щелочные растворы или пользуются специальным реагентом – Муколизином. Для качественного и полного разжижения емкость периодически встряхивают – вручную или с помощью шейкера. Через 20-30 минут материал готов для дальнейшей обработки.

Для этого в центрифужную пробирку емкостью 1,5-2 мл отбирают 1 мл мокроты и центрифугируют образцы в течении 10 минут при скорости 10000 об/мин.

После встряхивания образцы центрифугируют при ускорении
10000 G в течение 10 минут. После этого с помощью вакуумного отсасывателя, оснащенного колбой-ловушкой, аккуратно удаляют надосадочную жидкость. Осадок смешивают с 0,5 мл физраствора, тщательно перемешивают и вновь центрифугируют в течение
10 минут при скорости 12 000 об/мин. После повторного центрифугирования надосадочную жидкость вновь полностью удаляют. Оставшийся осадок ресуспендируют в физрастворе при тщательном перемешивании, доводя объем пробы для 0,1 мл.

Плазму выделяют из цельной крови, забранной из вены натощак, не позднее чем через 6 часов (хранение при комнатной температуре) или 24 часа (хранение в холодильнике при температуре от 2°C до 8°C) после манипуляции. При необходимости транспортировки биоматериала в лабораторию используют термосы или охлаждающие контейнеры.

Центрифугирование производится на скорости 3000 об/мин, время обработки образца – 10 минут. Для отбора полученной плазмы в пробирки Эппендорфа емкостью 1,5 мл пользуются специальными наконечниками с аэрозольными барьерами.

Если цель анализа – обнаружение в плазме фрагментов генетического материала бледной трепонемы (возбудитель сифилиса), осуществляется дополнительная концентрация посредством центрифугирования в течение 10 минут при ускорении 13 000 G. Вслед за этим супернатант полностью удаляется, 1 мл оставшегося осадка используют для последующего выделения дезоксирибонуклеиновой кислоты.

• в течение суток – в холодильнике при температуре от 2°C до 8°C;
• в течение месяца – в морозильнике при температуре -20°C;
• в течение продолжительного периода времени – при замораживании до -70°C.

Повторное замораживание плазмы не допускается, поэтому образцы для длительного хранения предварительно разливают в стерильные пробирки, способные выдержать глубокое замораживание.

После предварительной обработки биоматериал подвергают многократному повторному центрифугированию, в процессе которого происходит выделение РНК либо ДНК и их очистка.

Идеальным решением для оснащения лаборатории, внедряющей метод ПЦР-диагностики, станет микроцентрифуга с шестью угловыми роторами модели К1015 серии Pro-Research. С помощью данного прибора можно провести поэтапную подготовку для анализа мочи, плазмы и мокроты, выбрав подходящий ротор и скоростной режим.

К общим достоинствам центрифуг этой линейки также следует отнести:

• поддержку технологии автоматического определения модели ротора, что полностью исключает возможность превышения допустимых нагрузок;